中壓層析柱是利用生物分子間所具有純化技術(shù)，它是利用生物分子間存在的特異性相互作用，通過(guò)將具有親和力的兩個(gè)分子中的一個(gè)固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對(duì)另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。
 

　　中壓層析柱的操作步驟：
 

　　1 準(zhǔn) 備
 

　　在裝柱前，建議采用靜置沉淀法，確定膠懸液濃度，我們的填料是以50%的濃度儲(chǔ)存在20%的乙醇中。
 

　　2 檢 查
 

　　裝柱需借助裝柱系統(tǒng)完成，所有的組件必須處于完好的狀態(tài)，檢查玻璃部件，特別注意端部，應(yīng)更換末端有缺口的柱子。
 

　　3 清 洗
 

　　柱子和裝柱器在使用前，應(yīng)用20%乙醇潤(rùn)洗，檢查篩板，確保所選篩板的孔徑和所選填料的粒徑相匹配，確保底端部件和頂部適配器的管件連接牢固。
 

　　4 安 裝
 

　　1) 柱子用柱夾或鐵架臺(tái)固定，確保柱管沒有傾斜，垂直于地面，避免裝好的柱子出現(xiàn)寬泛而彎曲的條帶。
 

　　2)向柱中加入蒸餾水或20%乙醇至幾厘米的高度，利用重力作用讓柱中液體從底端管線中流出，排出氣泡，在柱底預(yù)留至少1厘米高度的液體，并用堵頭連接管線的錐形接頭。
 

　　3)再次混勻膠懸液，確保懸液均一，借助玻璃棒將膠懸液盡可能一次性貼壁倒入柱管中，用裝柱緩沖液加滿柱管。
 

　　4)將適配器管線連接注射器，排出適配器管線中的氣泡。逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)帽將固定帽、調(diào)節(jié)帽旋轉(zhuǎn)至調(diào)節(jié)桿最底端。
 

　　5)打開底部管線堵頭，將適配器垂直放在玻璃管上，順時(shí)針擰緊固定帽，請(qǐng)確保整個(gè)操作在一條直線上完成。注意不要引入氣泡。
 

　　6)按照填料說(shuō)明書推薦的流速運(yùn)行設(shè)備，不同的填料推薦的裝柱流速不同，很多填料會(huì)需要分2個(gè)階段進(jìn)行裝柱，第一步用推薦流速加快沉降，第二步用更高的流速(不超過(guò)推薦流速的30%)壓實(shí)填料，請(qǐng)?jiān)诹魉匍_啟前閱讀填料說(shuō)明書。繼續(xù)運(yùn)行至膠面穩(wěn)定，讀取刻度并記錄。
 

　　7)停止設(shè)備流速，將適配器順時(shí)針向下擰至讀取刻度下2~3mm，繼續(xù)運(yùn)行流速，如果膠面發(fā)生改變，可以重新調(diào)節(jié)適配器高度。裝柱完成。